推薦反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。

　　蛋白酶k配制標(biāo)準(zhǔn)：20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinase K)：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

　　蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效保證12月。

　　孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。

　　作用：蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會，提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片的脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果。

　　蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛，它可以消化包圍靶DNA蛋白，因此使用蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結(jié)合的機會增強雜交信號，但在使用蛋白酶K時要主要使用的濃度，過高或者過低都會破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、核消失等影響試驗結(jié)果。